Определение видовой принадлежности мяса с помощью реакции преципитации

В случае, когда видовую принадлежность мяса невозможно определить визуально, применяются лабораторные методы исследования. Одним из них является реакция преципитации, в результате которой в виде мутного кольца формируется и осаждается преципитат – смесь подготовленного растворимого молекулярного антигена с антителами. Таким образом удается определить вид мяса даже тогда, когда оно прошло тепловую обработку, замораживалось или засаливалось. Существует довольно много разновидностей этого метода. Чаще всего для исследования используются пробирки, кроме них – питательные среды и гели.

Последовательность проведения

Подготовка экстракта

Исследуемое мясо отделяют от жира и соединительных тканей, измельчают и переносят в пробирку. Добавляют физраствор так, чтобы он полностью покрыл пробу. В таком виде оставляют на 3 часа, если мясо сырое, и на 24 часа, если оно вяленое или вареное. Далее экстракт забирают пипеткой, фильтруют до прозрачного состояния.

Концентрация белка в подготовленном экстракте должна быть приближенной к отметке 1:1000, поскольку титр преципитирующих сывороток будет больше этой отметки. Для определения этого показателя в экстракт опускают стеклянный капилляр на 10 см, по которому он начинает подниматься. Затем капилляр опускают в азотную кислоту, которая также начинает в него поступать. В месте контакта жидкостей выпадает осадок белка в виде белого кольца. Если он слишком густой, экстракт разводят физраствором, а потом повторяют пробу. Процедура проводится до тех пор, пока не будет выпадать очень слабый, чуть заметный, осадок. Осадка не будет вообще, если концентрация белка будет меньше чем 1:1000.

Установка титра преципитирующих сывороток и определение их специфичности

Сыворотку крови животного последовательно разводят в небольших пробирках до концентраций 1:100, 1:1000, 1:5000, 1:10 000 и т. д., учитывая титр, указанный на ампуле. К 0,9 мл этих разведений добавляют по 0,1 мл преципитирующей сыворотки, начиная с минимальной концентрации. Сыворотка должна иметь титр 1:10 000, а это значит, что белок сыворотки животного того вида, на который она изготовлена, в разведении 1:10 000 осядет за 10 минут. При этом она не будет давать осадка с другими такими же растворами в концентрации 1:1000 в течение часа. Титром преципитирующей сыворотки считают наибольшее разведение антигена, которое при взаимодействии с иммунной сывороткой дает помутнение.

Проведение исследования

Эксперты устанавливают 4–7 рядов мелких пробирок, по три в ряду. В первые в каждом ряду вливают по 0,9 мл приготовленного экстракта мяса, во вторые – по 0,9 мл физраствора, в третьи – по 0,9 мл разведений сывороток разных животных в соотношении 1:1000. Далее в пробирки первого ряда добавляют по 0,1 мл сыворотки, вызывающей преципитацию белка коровы, второго –лошади, третьего – свиную, далее – овечью, козью, собачью и другие.

Оценка результата

Реакцию считают специфической, если помутнения в виде колец появились в течение 1 часа. Если на выпадение осадков потребовалось больше времени, реакция будет неспецифической. Ее результаты оценивают на темном фоне. Осадок в первой и третьей пробирках одного ряда свидетельствует, что экстракт был приготовлен из мяса животного, которому соответствует специфичность сыворотки. В первых пробирках других рядов реакция будет отрицательной, а в третьих – положительной. Вторые пробирки всех рядов с физраствором использовались для контроля, реакция в них должна быть отрицательной.

Реакция преципитации является надежным методом определения видовой принадлежности мяса.